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Ok ti ringrazio molto..., ci provo .Buona giornata

8 giorni. ma solo perche dopo le processiamo per gli esperimenti. di solito possono vivere fino ad un massimo di 2 settimane.

Ciao! Sì, anche noi espiantiamo il cuore sotto cappa e sterilizziamo tutti gli strumenti..... in ogni caso, come ho già scritto prima, provando ad aumentare il numero di lavaggi una volta ottenuta la dissociazione (e lavando un pò più accuratamente il preparato anche subito dopo l'espianto) sono riuscita ad ottenere delle fiasche "pulite".... per ora ovviamente.... vedremo nei prossimi giorni... Tu per quanto riesci a...

scusate forse non mi sono spiegata bene.. i puntini sono sopra alle bande, come a creare una nube..non ridete di me per favore.

ho capito quello che mi hai spiegato tu..ma ci sono delle contraddizioni allora nella mia fonte leggi: "scambiatore forte è quella resina che è ionizzata a pH elevato , al contrario quella debole. Un proteina ionizzata a pH 10 richiede l'uso di uno scambiatore forte, mentre se una proteina è ionizzata a pH 6 basta uno scambiatore debole" a me sembrava il contrario..lo scambiatore forte ha un pka di 1 quindi e' ionizzato...

se non sai quante cellule VIVE piastri per ogni split non potrai mai fare una curva di crescita corretta.. comunque come ho scritto all'inizio non si può stabilire un volume in cui risospendere il pellet, se hai 300.000 cellule o 30milioni i volumi sono diversi! Per me una buona diluizione è quella per cui per ogni campo/"quadratone"/camera che dir si voglia ci sono un centinaio di cellule, e ne conto 3 in diagonale, o 2 ai...

scusami ho letto solo adesso... dunque i MEF sono molto meglio degli umani HF se ti può rincuorare... io li trasfetto con lipofectamine plus seguendo il normale protocollo... invece nelle mie mani la lipo 2000 mi crea più tossicità anche se è usata ugualmente.. ti consiglio però di provare a fare una curva di tossicità anche con la lipo 2000 cambiando i rapporti tra DNA e Reagent... ne troverai sicuramente l'optimum (soprattutto se...

ciao! intanto in bocca al lupo! che impresa! Io ho provato a lavorare con il cuore di ratto, e ci ho messo un secolo prima di avere una dissociazione decente... ma probabilente io sono un caso clinico! Nel mio lab fanno quotidianamente dissociazioni da cuore di topo, se vuoi domani chiedo. Per quanto li devi far crescere? noi siamo arrivati a 1 settimana, ma credo che aggiungessimo antibiotico... voi come fate? Ancora in bocca al lupo

Ciao non ho la mimima idea di cosa possano essere i tuoi puntini. Non sono un esperto in WB ma prova a fare il transfer a 30 volts Over NIght a 4°C. Wish you luck Davide

Quindi?? b o c?